體外誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向血管平滑肌細(xì)胞分化
來源:醫(yī)學(xué)空間
中國研究者應(yīng)用血小板衍生生長因子BB(platelet-derived growthfactor BB,PDGF-BB),體外誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(human bone marrowmesenchymal stemcells,hBMSCs)向血管平滑肌細(xì)胞表型分化,探討該方法的可行性及誘導(dǎo)細(xì)胞作為組織工程血管平滑肌種子細(xì)胞的可行性。
研究者抽取健康成人志愿者骨髓,經(jīng)密度梯度離心分離得單個核細(xì)胞,PDGF-BB(20ng/ml)誘導(dǎo)hBMSCs向血管平滑肌樣細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)分化,觀察細(xì)胞形態(tài)變化。免疫熒光檢測細(xì)胞內(nèi)血管平滑肌肌動蛋白α(vascular smooth muscleα-actin,SMα-actin),血管平滑肌鈣結(jié)合蛋白(vascular smoothmuscle calponin,SMcalponin),血管平滑肌肌球蛋白重鏈(vascular smooth muscle myosin heavy chain,SMMHC)和細(xì)胞血管平滑肌鈣結(jié)合相關(guān)蛋白(smooth muscle22α,SM22α)表達(dá)情況;反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測誘導(dǎo)后血管平滑肌細(xì)胞SMα-actin,SMcalponin,SMMHC和SM22α的mRNA表達(dá)。Western印記檢測SM22α的表達(dá)。流式細(xì)胞分析技術(shù)(fluorescence activated cell sorter,FACS)分析誘導(dǎo)后細(xì)胞內(nèi)SMα-actin,SMcalponin,SMMHC的表達(dá)。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)PDGF-BB20ng/ml誘導(dǎo)后可見單層培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)呈“成纖維細(xì)胞樣”。免疫熒光檢測示SMα-actin,SMcalponin,SMMHC,SM22α表達(dá)陽性;RT-PCR檢測SMα-actin,SMcalponin,SMMHC,SM22α的mRNA陽性表達(dá)。Western印跡檢測SM22α的表達(dá)為陽性。FACS分析表明誘導(dǎo)后,SMα-actin,SMcalponin,SMMHC表達(dá)均增高,與未誘導(dǎo)組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P〈0.05,n=3)。由此,研究者得出結(jié)論,人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在PDGF-BB的誘導(dǎo)下可向血管平滑肌細(xì)胞表型分化,有望成為血管組織工程血管平滑肌種子細(xì)胞的來源。